先天性厚甲症（pachyonychia congenita PC）表现为指(趾)甲显著肥厚，掌跖角化过度、多汗，肘膝臀部出现毛囊角化过度性皮损等。常伴外胚叶发育不良的临床表现，主要影响上皮附属器，导致严重的甲过度角化及营养不良。可分为Ⅰ、Ⅱ两型，Ⅰ型特征为口腔黏膜白斑和掌跖角化症，Ⅱ型则为表皮下囊肿，诞生牙，但甲基本正常。Ⅰ型PC突变基因为K6a、K6B和K16，Ⅱ型为K17。

角蛋白相关疾病动物模型的建立在对角蛋白功能的理解，致病基因的确定及研究中的治疗方法都很有意义。

Prkra小耳小鼠(B6.Cg-Prkralear)

1. Prkra小耳小鼠繁殖

小鼠饲养条件是按照普通常规鼠笼饲养,每个笼不超过5 只小鼠。繁殖方式:用同窝的1 只雄性和1 只雌性交配获得杂合小鼠,饲养到可以生育的成年鼠后,然后杂合与杂合再交配,得到没有表型的杂合雌、雄小鼠。

2. Prkra 小耳小鼠的基因点突变检测

DNA 测序:设计引物进行Sanger 法测序,应用试剂盒法裂解鼠尾提取DNA,洗脱出的DNA 于-20 ℃ 保存。通过引物3 在线平台( http:/ /primer3.ut.ee/ )设计候选变异引物,Prkra 正向引物为TTCAGTAGCGAGCCAGCAC,反向引物为ACAAC

TGTCCGCTCTGTCG。聚合酶链式反应(PCR)反应体系:金牌Mix(green)27 μl,正向引物1 μl,反向引物1 μl,模板DNA 1 μl。

Prkra 小耳小鼠野生型(上)、杂合型(中)和纯合型(下)的测序峰图,突变位点为在2 号染色体76、643、218 bp(GRCm38)上的G 向A 的突变,该突变位点位于第3 外显子之后

利用CMV启动子建立的系统表达Keratin4E609K突变基因，在口腔粘膜和皮肤均有高表达（图1），并且在口腔粘膜表现口腔粘膜棘层细胞的空泡样变性（图2）。